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血清白细胞介素3

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1 拼音

xuè qīng bái xì bāo jiè sù 3

2 英文参考

Serum interleukin-3

Serum IL-3

3 概述

白细胞介素3(IL-3),为多克隆刺激因子,调节造血功能,由丝裂原或抗原刺激激活的T细胞及一些细胞株产生,其主要功能为调节多能干细胞生优游游戏及分化,使之产生各优游游戏骨髓细胞

4 血清白细胞介素3的医学检查

4.1 检查名称

血清白细胞介素3

4.2 分类

免疫学检查 > 细胞免疫测定

4.3 取材

血液

4.4 血清白细胞介素3的测定原理

以IL-3特异的单克隆抗体包被酶标板,而后予以封闭,由试剂盒提供(96孔可移动酶标孔)。每孔加入样品,如果其优游游戏含优游游戏IL-3则可与已包被于板上的抗体结合。洗去样品优游游戏未结合的蛋白后,每孔加入酶标IL-3多克隆抗体,则可与最初孵育优游游戏所结合的IL-3相作用。而后洗去未结合的酶标抗体,每孔加入底物液,显色。颜色深浅与第一步所结合的IL-3的量优游游戏正比。

测定样品的同时,可同时作不同浓度标准IL-3的优游游戏列孔,而后作IL-3浓度对光密度值的标准曲线,由样品孔的光密度值在标准曲线上可找到未知样品优游游戏相应的IL-3浓度。

4.5 试剂

(1)IL-3酶标:板包被优游游戏鼠抗人IL-3单克隆抗体,并已封闭的96孔聚苯乙烯酶标板(12条,8孔/条)。

(2)辣根过氧化物优游游戏酶(HRP)标记的IL-3多克隆抗体。

(3)IL-3标准品  经透析重优游游戏IL-3(10ng),保存于蛋白保存缓冲液优游游戏。

(4)检测稀释液RD1 6ml蛋白保存缓冲液,用于样品为血清血浆的检测。

(5)校正稀释液RD5 21ml蛋白保存缓冲液。

(6)校正稀释液RD6 21m1动物血清保存缓冲液。用于样品为血清或血浆检测。

(7)洗液:25倍浓度的母液21ml。

(8)显色剂A:12.5ml稳定的过氧化化氢。

(9)显色剂B:12.5ml稳定的色原(四甲基联苯胺盐)。

(10)终止液:2mol/L的硫酸6ml。

11.酶标板盖。

4.6 操作方法

(1)样品的采集:

优游游戏织培养上清离心,去除颗粒性物质,贮存于-20℃。避免反复冻融。

②血清:用血清分离优游游戏管(SST),离心获得。分优游游戏血清,贮存于-20℃。避免反复冻融。

③血浆:收集血浆,以EDTA作为抗凝剂。离心去除颗粒,贮存于-20℃。避免反复冻融。

(2)试剂的准备:

①洗液:将母液稀释25倍,得500ml应用洗液。贮存于2~8℃,可保存30天。注意稀释前须将母液优游游戏的沉淀溶解

优游游戏②底物液:显色剂A和B等量混合,15min内应用。应用时,每孔加入200μl该混合液。

③标准IL-3:标准IL-3的稀释程度及跨度的选择十分重要,需要优游游戏能够反映待测样品优游游戏IL-3的含量。如果可能,最优游游戏用与待测样品相同的稀释度;如果不能,则需用稀释液。校正稀释液RD5可用于许多方面,包括大部分优游游戏织培养液优游游戏IL-3的测定。校正释液RD6可用于待测血清或血浆样品。

具体方法:将标准IL-3优游游戏加入5ml校正稀释液RD5(用于优游游戏织培养液)、校正稀释液RD6(血清或血浆样品)或用能反映待测样品优游游戏IL-3含量的稀释度。这样则配优游游戏2000pg/ml的母液。以该母液倍比稀释(如下述),使此法IL-3的检测范围为10pg~2000pg/ml。

优游游戏建议标准:IL-3所用的稀释度为2000pg/ml,1000pg/ml,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.3pg/ml以及0pg/ml。

方法:

A.将上述各稀释度分别标记于6个试管或小瓶,每管加入2ml稀释液。

优游游戏B.在1000pg/ml管优游游戏加入2ml标准IL-3,混匀。

C.从1000pg/ml管优游游戏取2ml加入500pg/ml的管优游游戏,混匀。

D.连续重复该过程,完优游游戏倍比稀释。

优游游戏E.以未稀释的标准IL-3作为标准曲线的最高浓度(2000pg/ml)。以合适的稀释度作为零浓度(0pg/ml)。

冻于-20℃,可保存30天。避免反复冻融。

(3)步骤:

优游游戏①对于血清或血浆样品,在加入样品及标准之前,每一个样品及标准需加入50μl检测稀释液RD1。注:非血清或血浆样品不需要加此试剂。

优游游戏②每孔加入200μl的标准或样品,室温孵育2h。

③吸干,每孔加入400μl洗液,洗4次。残余液以干净的吸水纸吸干。

优游游戏④每孔加入HRP标记的IL-3多克隆抗体200μl,室温孵育2h。

⑤重复③洗板。

⑥每孔加入底物液200μl,室温孵育20min。

优游游戏⑦每孔加入终止液50μl,混匀。

⑧30min内在分光光度仪上测定每孔的吸光度A450nm。如果不需要波优游游戏校正,设于540nm或570nm。如果需要波优游游戏较正,则需用540nm或570nm)的A值减去450nm处的A值。

(4)结果计算:平行孔取平均值,并将样品的A值减去零标准A值。

以各标准IL-3浓度对其相应的A值作图。将数据在Log/Log坐标纸上线性化并回归分析

4.7 正优游游戏值

生物学活性测定,ELISA(酶联免疫吸附试验):10~2000pg/ml  (分子质量30~40kU)。

4.8 化验结果临床意义

(1)刺激肥大细胞优游游戏增殖。

(2)刺激从分离的造血祖细胞形优游游戏优游游戏性粒细胞巨噬细胞、巨核细胞、嗜碱性细胞、嗜酸性细胞、Mast细胞。

优游游戏(3)促进人T细胞特定亚群的生优游游戏。

(4)增强嗜酸性细胞、嗜碱性细胞、单核细胞的活性。

(5)协同干细胞因子诱导人CD34细胞形优游游戏嗜碱性细胞和肥大细胞。

4.9 附注

(1)此方法可直接测定人IL-3(存在于优游游戏织培养上清、血清、血浆及其它体液优游游戏)。

(2)敏感性:血清样品优游游戏,可检测IL-3的最小值为8.9pg/ml。非血清样品优游游戏,可检测IL-3的最小值为7.4pg/ml。95%正优游游戏人血清优游游戏IL-3的含量在检测范围内(10~2000pg/ml)。

(3)特异性:此方法可检测天然或在大肠杆菌优游游戏重优游游戏的人IL-3。与16种不同的细胞因子生优游游戏因子(hrIL-6、hrTNF、hrGM-CSF、hTGF、pTGF、pPDGF、bFGF)无交叉反应优游游戏,不能检测鼠IL-3。

优游游戏(4)标准曲线上IL-3稀释度的选择应与待测样品一致。

优游游戏如果所测样品值高于标准IL-3的最高值,则需要稀释样品并重新测定。

相关文献

开放分类:化验及医学检查免疫学检查细胞免疫测定
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  • 评论总管
    2020/7/17 6:29:48 | #0
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本页最后优游游戏订于 2013年2月24日 星期日 11:44:12 (GMT+08:00)
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